不看会后悔软件设计引物与手工设计引物

引物设计的方法

1、软件设计

其实各种软件都差不多，没有必要纠结哪个软件好不好，另外，设计的引物，PCR扩增很大程度上与扩增的酶也有关系，特别是有特殊结构的片段，GC含量过高或者过低，都会导致扩增效率下降，此时就得选择合适的酶。酶的牌子就不用说了，肯定是欧美的牌子要好，有些牌子的酶，稀释到30%也能扩增普通的片段。

2、手工设计

遇到软件设计不出的，或者需要扩增全长的，只能手工设计了，经验丰富的人，大致看一下就知道选哪一段。

注意：

1、不要纠结退火温度，计算方法不同，得出的退火温度也有差异，只要差不多就行了，一般是55-65度之间。同一对引物，我也遇到过55-65度都扩增的非常好。所以，以后就不要再询问引物退火温度的事情了，这不是个值得你纠结的问题。

2、mrna的荧光定量引物设计，正向引物设计在编码区尾端，反向引物设计在靠近尾端的非编码区区域，这样DNA就扩增不出了，扩增出来的都是mRNA。