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一种新型BRAFV600E突变荧光PCR
BRAF是RAF基因家族成员，编码细胞质丝氨酸/苏氨酸激酶，是丝裂原活化蛋白激酶信号通路的关键组成部分。BRAF基因突变体与多种癌症的发病机理有关，包括黑素瘤，非小细胞肺癌，结肠直肠癌，乳头状甲状腺癌和卵巢癌等。
BRAF的激活突变可以预测对RAF或MEK抑制剂的敏感性。VE特异性抑制剂维罗非尼和达拉非尼以及MEK抑制剂曲美替尼，已经由FDA批准用于黑素瘤治疗，且NCCN指南《非小细胞肺癌临床实践指南》（v3.）推荐将威罗非尼、达拉非尼或达拉非尼联合曲美替尼扩展用于携带BRAFVE突变的非小细胞肺癌患者的治疗。另外，NCCN指南《结直肠癌临床实践指南》（v3.）建议，转移性结直肠癌患者在使用EGFR抑制剂（西妥昔单抗、帕尼单抗）靶向药物治疗前，应考虑检测BRAF基因状态，当患者携带VE突变时，使用抗EGFR单抗治疗是无效的。因此，了解BRAF基因的突变情况，已成为临床靶向药物治疗中筛选EGFR-TKIs和BRAF基因突变靶向药物收益患者的需要。
今天小编为大家介绍一下大连晶泰医检所与北京基因组研究所、中国食品药品检定研究院合作开发出的一种新型BRAFVE突变荧光PCR检测方法。
目前BRAF基因检测方法包括探针扩增阻滞突变系统（ARMS）、测序法、高分辨率溶解曲线分析技术（HRM）和高效液相色谱法（DHPLC）。本研究在PCR荧光探针法的基础上采用了专利技术ModifiedARMS+酶切富集法，使检测体系在灵敏度和特异性上更具优势。
简单来说，其检测原理是在BRAFVE位点区域设计突变型和野生型ARMS引物，其中突变型ARMS引物用来检测VE是否存在突变，野生型ARMS引物作为内标用来监控检测样本DNA提取是否正常。将突变型ARMS引物和野生型ARMS引物分别加入至VE检测体系和内标检测体系中，另外将根据VE突变和野生型序列酶切位点特点所挑选出的限制性内切酶TspRI加入至VE检测体系中用于消化野生型基因。然后进行荧光PCR反应来检测样本中是否存在BRAFVE突变。
那么这种检测方法的效果怎么样呢，我们用数据来说话：
１、准确性成功检测出临床阳性样本，且与测序结果相符。
２、灵敏度使用BRAFVE突变质粒进行灵敏度评价，结果显示可检测到10copies/μL。
３、特异性对20份正常人的基因组DNA进行检测，结果显示VE检测体系均无特异性扩增信号。
从各方面指标上来看，此检测方法还是比较靠谱的，具备临床转化的基础，那我们就静待研发团队继续努力优化此检测体系，进而将其作为体外诊断试剂推出市场吧！
文献来源：
曲守方、于婷等
BRAF基因VE突变检测的荧光PCR方法的建立[J]药物分析杂志,:35(8).
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