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qPCR引物设计
转自:科研狗作者不详
引物设计是qPCR中最为关键的一环,好的引物设计就等于成功了一半。
qPCR引物设计原则1.引物扩增产物长度应该控制在80-个碱基,保证产物的Tm值在80-90度之间。2.引物扩增的产物最好横跨一个内含子,以避免基因组DNA的污染。3.引物GC含量适中,一般40-60%,最好45-55%。4.引物本身不能连续四个碱基互补,引物之间也不能连续四个碱基互补。5.引物的3‘端要避开密码子的第三位,且尽量避开AT和GC富集区假如我们要设计一个检测Rb水平的qPCR引物,我们该如何做呢?先看看数据库里面有没有要设计一个mRNA的qPCR引物,首先我们应该做的是看看是否别人已经使用过了。我们这里介绍一个数据库:PrimerBank(早期白癜风能治好吗北京哪里能治好白癜风