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PCR失败了，你知道原因吗
PCR实验失败了，跑不出带。你是不是无颜面对你老板了，这么简单的实验也会出现失误。
今天，我们就给大家来总结一下PCR失败的原因，方面在老板面前有好的说辞，迅速解决问题。
模板质量问题
1模板提取不完整，其中不含目的基因或者目的基因含量太低
可以通过电泳，检查提取的DNA，看看PCR阳性样品和银杏样品是否有明显差别。那样我们可以尝试增加模板量
2模板里残留某种试剂成分，可能抑制Taq聚合酶的活性
我们可以用试剂盒把模板再纯化一下，或者将模板做个梯度稀释以确定最佳的模板量
引物问题
1样品自身的基因型差异导致扩增失败
当引物和某基因型的样品结合的好，但和另外一些基因型结合的不好，可以换一对保守的引物试试
退火温度问题
1退火温度过高
可以尝试做个梯度PCR来检查尝试一下
循环次数问题
1循环次数太少或者延伸时间过短以致目的基因扩增量不够
但是这个可能性比较低
dNTP问题
1dNTP浓度低时PCR产率及特异性均增高
这个适用于用扩增掺入法标记生物素及放射性元素。
PCR产物电泳
1电泳图不清晰
可能电泳缓冲液和制胶囊缓冲液浓度不准或者脏了，我们要立马把缓冲液和制胶囊缓冲液换掉，在我们跑出来的胶中显示maker都出现了问题，那很可能是胶的问题或者电泳操作问题了。
2PCR扩增时出现了涂抹带或者片状带或者地毯带这样的状况
可能原因：酶量过多或者酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多所引起。
应对：①减少酶量或换另外来源的酶；②减少dNTP的浓度；③适当降低Mg2+浓度；④增加模板量，减少循环次数。
酶失活问题
1假阳性，出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致，有时其条带更整齐，亮度更高
可能原因：①引物设计不合适，靶序列太短或引物太短，容易出现假阳性；②整个基因组或大片段的交叉污染；③空气中的小片段核酸污染
对策：①需重新设计引物；②操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外；③必要时，在加标本前，反应管和试剂用紫外线照射，以破坏存在的核酸；④可用巢式PCR方法来减轻或消除。
2出现非特异性扩增带
可能原因：①引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体；②Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关；③酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。
对策：①必要时重新设计引物；②减低酶量或调换另一来源的酶；③降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数；④适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性，65℃左右退火与延伸)；⑤降低Mg2+浓度。
3出现片状拖带或涂抹带
可能原因：酶量过多或酶的质量差；dNTP浓度过高；Mg2+浓度过高；退火温度过低；循环次数过多。
对策：①减少酶量，或调换另一来源的酶；②减少dNTP的浓度；③适当降低Mg2+浓度；④增加模板量，减少循环次数。
经过上边的分析，大家可以看看有木有戳中那个你错的原因啊~
好了，那我们明天继续~
编辑：咸鱼君
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