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ldquo我们只骗中国人,他们人傻钱
在你的身边，是否有一群这样的人，在他们的思想中，根深蒂固着“只要是国外的都是好的”、“外国人就是比中国人诚信”的思维？甚至还有人以此为荣？如果有，请提醒他们：你可能正在被贴上“人傻钱多”的标签。
那么，究竟是怎么回事呢？今天，就让我们把目光投到海外，一探究竟：
西班牙黑心商：查获大批假奶粉，专骗中国人！年4月中旬，西班牙媒体《ElPeriódico》报的一纸新闻引爆海外华人代购圈，也震惊了无数的宝妈：西班牙警方在西班牙东北部Girona城里偶然发现了一家专门生产假奶粉的西班牙工厂，并当场缴获了8吨假奶粉。根据媒体和警方的披露，现场还散落着欧美各大知名奶粉品牌的包装，除了奶粉造假外，其他几乎跟真的一模一样。
西班雅警方查获的假奶粉
据悉，这些奶粉均属于没有营养价值的假货，并且有被污染的可能，将严重危害儿童的正常发育与身体健康。
西班牙警方还表示：“这是一起跨国的假奶粉贩卖案，牵扯国家很多，罪犯通过第三国的网站售卖奶粉，在必要的时候伪装成正规厂商，接到订单后从巴塞罗那发货，他们主要骗不知情的中国人，因为中国人很信赖这些品牌”。而根据媒体的描述显示，这并不是西方首次发现专门制造假奶粉坑骗中国人的事件，早前在波兰同样破获了相同的假奶粉案，主要受害群体也是中国人，而法国、意大利以及德国等国，也出现了有毒受污染奶粉销往中国的情况（正规奶粉被卫生部门检测出高危细菌污染，在召回的情况下依旧有不少中国家长糊涂购买）。
西班牙食品卫生部门的相关人员表示，因为这些假冒产品的工人，在没有任何卫生保障的情况下徒手包装奶粉，因此问题可能不仅仅是奶粉有无营养那么简单，还可能存在有毒物质过量和细菌污染等情况，仍处于在哺乳期的孩子一旦食用，不仅仅会造成营养不良的后果，还可能出现致命性的伤害。
泰国燕窝商贩：树胶熬制假燕窝，中国人吃得美滋滋除了西班牙和波兰的假奶粉外，引起国人警觉的，还有泰国的假燕窝。
这几年，随着中国人的养生意识不断增强，再加上媒体等对“燕窝”功效的过度渲染，导致了泰国乃至整个东南亚地区的燕窝市场火爆。随着越来越多中国人到这些地区疯狂购买燕窝的现象不断出现，市场出现了难以供求的状况，在这样的背景下，当地的商人们发现中国人“既单纯，又富有，很相信别人”，因此，坑中国人的勾当也应运而生。
根据泰国媒体的爆料：泰国特案厅联合泰国卫生部、泰国旅游警察，在泰国的芭提雅等地查处了9家黑心燕窝餐厅！而且，主要的受害者，均为中国人。
泰国警方表示，这些餐厅售卖给中国人的燕窝均为假燕窝，大多数是用印度的特殊树胶和泰国本地的椰子壳熬出来的，从制作流程到顾客的碗里，没有出现过一滴的燕窝。
有媒体指出，这些商贩之所以会售卖假燕窝给中国人，不是单纯的因为中国人“好骗”，而是其中有着非常可观的暴利。据悉，用树脂熬成的假燕窝每千克的成本仅为泰铢左右，而真正的燕窝成本价在十几万到几十万泰铢。
俄罗斯珠宝商：中国人“人傻钱多”，10倍高价都要买俄罗斯同样被爆出“专骗中国人”的情况，最严重的是在珠宝行业。
从俄罗斯媒体的爆料中可知，最先发现“坑中国人”情况的，是一位误打误撞的俄罗斯大妈。有一天，大妈企图进入一家珠宝店购买商品，却不料被门卫告知俄罗斯人不许入内，但大妈看见，店铺正在接待来自中国的游客。大妈几次要求进入，保安却死守着不让，并表示：这家商店只服务中国人。
最后，保安被大妈的执着打败，等中国人都走了之后，才让大妈进去看看。大妈进去后，真的是“不看不知道，一看吓一跳”，里面堆满了各种各样的高档品！
然而，真正让大妈感到震惊的，不是这里面琳琅满目的奢侈品，而是这些商品的售价——所有商品的价格，都比正常市面价格高出十几倍，难怪不允许俄罗斯人进入！
不过好在，这位好心的俄罗斯大妈将这件事公之于众了，但话又说回来，这样的地方难道就这里一家吗？答案显然不是。所以，出国在外，请各位同胞擦亮自己的眼睛，要不然真变成“人傻钱多”的代表了。
各国免税商店：假货只骗中国人，高价专坑中国人！前面提到的，都是街头市井里的坑骗之术。事实上，为了骗到中国人的钱，一向以此为荣的某些西方和日韩群体，可以说是使劲浑身解数，无孔不入。
1：澳大利亚-我们的免税店只卖假货给中国人
澳洲品质怎么样？想来，一提起这些字眼，许多人会骄傲地说：“我每次都在他们的免税店买很多，人家的东西确实好！”
然而，经澳大利亚媒体和中国媒体联合调查发现：澳洲免税店专坑中国人。
在澳洲媒体的报道中，有中国游客投诉爆料称：曾在澳洲免税店购买了高达9.3万元的商品，回国后发现自己被骗了，全部都是是三无产品，而且根本难辨真伪。
此外，媒体还披露，在不少免税店里，同一样东西，卖给中国人和其他国家人的价格是不一样的。卖给中国人的售价，往往比正常市面上的价格还要高出许多，毕竟“中国人相信白人的诚信”。甚至有人爆料称，这些商品不一定是来自澳大利亚的，很多可能以更低的价格从第三方国家购入，贴上了“madeinAustralia”的标签后以高价出售给中国人。
2：英国伦敦-打折券没有中国人的份，反正他们好骗
澳大利亚如此，他们的“宗主国”英国也毫不逊色。
年2月初，一位中国留学生在网上抛出了自己在伦敦希思罗机场的遭遇：中国乘客在机场购物时候遭到严重的不公平对待。这种针对中国游客的种族歧视，是每一个中国人不能接受的。
该留学生的爆料内容是：机场满一定数额的消费，会给一张优惠券，但这张优惠券，唯独对中国人实行了“双标”。也就是说，在所谓的人类平等的情况下，中国人必须消费更多才能获得优惠券，甚至是拿了优惠券后，反而被“宰杀”。
事情被曝光后，很快就在各大媒体以及海外华人圈内引爆，在短短数小时内，机场就被成千上万人通过邮件举报、抗议，再加上媒体的报道发酵，英国相关部门和机场方面迅速出面道歉，表示自己“对不起中国人”。
3：日韩商店-假面膜，日韩造，中国人敷得美美哒
世界永远不是我们幻想中的那样单纯，哪怕是就近的日韩邻国，也做足了功夫，想方设法骗中国人的腰包。
我们的邻国日本，在很多人看来是一直以“诚信”著称的，然而，日本的媒体揭露的事实却让人着实心寒。根据媒体披露，有不少的日本商家，设计好了方案来骗中国人。
这些商家的广告往往分为两种，一种是给他们眼中的普罗大众的，一种是给他们眼中“人傻钱多”的中国人的，他们甚至会和黑心导游一起，联合各种手段，让中国顾客相信各种产品的神奇功效…而出于对所谓的“日本品质”的信任，有不少的人上当受骗，稀里糊涂就买了一堆“神药”，甚至是带着中国自己产的马桶盖回国了······
更让人感到气愤的是，借助中国人对“日本品质”的信任，日本人开始玩起了商业游戏。早前日本《富士晚报》就曾刊登出《如何向中国人高价销售日本产品的方法》的文章，该文章号召日本人通过电商向中国人售卖日本产品，文章甚至重点强调了如何“高价卖给中国人”的方法，说的直白点就是：怎么才能骗中国人的钱。
此外，韩国也丝毫不懈怠。据《东亚日报》报道，韩国首尔的一些化妆品店内，有一些打着特价的化妆品，是专门卖给中国人的，这些产品价格仅为原价的20%左右，均为地下工厂专门为中国游客生产的。甚至有销售员向调查人员表示：中国人往往一买就买很多，他们真的以为东西会这么便宜。
据韩国媒体的综合报道，这些化妆品的外包装和正品一模一样，但成分却是胡乱搭配的，许多元素的含量都严重超标——也许你宁可认为是自己的皮肤过敏，但你却不愿意相信他们卖给你的是假货，你自然可以这样安慰自己。
从媒体的暗访镜头中，我们可以看到，现场的卫生条件相当“好”：加工过程中不用戴手套，员工也没有任何健康证明...所有的程序，除了包装外，都显得粗劣肮脏...
更可恨的是，这些产品会在中国游客聚集的各大商场上架，因为售价较低，往往也会吸引不少韩国人想购买，但出于“民族”情怀，商家也都会拒绝售卖，他们只卖给中国游客。
擦亮眼睛，保护好自己的钱包和切实的利益，毕竟“天下乌鸦一般黑”。理性看待世界，切莫过于信赖所谓的海外品质。遇到类似问题，大胆说出来，莫要让你的忍气吞声，成为他们变本加厉的资本，也不要用你的钱包，去滋养一群侮辱中国人“人傻钱多”的无良群体。
来源：郎言志（ID：liusilang）
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摘在生态毒理学受试生物研究上，国内外已经开发了多种受试生物品种，如斑马鱼，大型溞，浮萍，虹鳟，牡蛎，稀有鮈鲫和青鳉等[-]，但是关于淡水双壳类底栖生物的报道很少，河蚬作为中国本土的底栖物种，分布广，敏感性强，易取样，能直接反映水污染现状。本研究通过Illumina测序技术获取河蚬miRNAs信息，为研究miRNA在环境毒理学上的应用提供了基础。利用RACE技术，克隆典型河蚬肠促胰酶肽（Cholecystokinin），Conopressin神经肽和FF神经肽基因，并进一步选取了具有神经毒性的污染物有机磷酸酯，筛查敏感的神经肽标志物，为神经肽的毒理学研究与应用提供了科学依据。使用转录组测序技术评估TDCPP和TBP对河蚬内脏团的毒理机制，为我国对TDCPP和TBP的风险评估提供依据。本论文的技术路线如图1-1。图1-1本论文的技术路线?第二章基于Solexa技术的河蚬保守和新microRNA的鉴定与特征分析2.1引言河蚬作为我国本土淡水贝类是生态毒理学研究的优势物种，陈辉辉等[]通过转录制测序发现了一些环境标志物基因，如cyp30,hsp70,GABARAP,TPX1,和SOD。但是目前还没有河蚬环境相关miRNAs的报道。因此在本研究中，我们使用Solexa测序技术鉴定了河蚬中的miRNAs。此外还使用荧光定量PCR测定了特定miRNA转录本在不同组织中的表达情况，两种法则被用来预测miRNAs的潜在目标，本研究提供了河蚬miRNAs数据，为以后研究河蚬miRNAs的生物学功能和进化提供了技术。2.2材料和方法2.2.1河蚬的养殖河蚬取自洪泽湖，养殖方法见附录12.2.2miRNA的提取与测序首先使用天根miRcutemiRNA提取分离试剂盒对河蚬miRNA进行提取，然后在3’和5’接头加上测序序列，接着进行反转，建库，PCR扩增，使用聚丙烯酰胺凝胶分离纯化-nt的小RNA，加接头，最后上机测序。提取与测序流程如图2-1。图2-1miRNA库建立与测序2.2.3miRNA测序数据生物信息学分析由Solexa测序产生的单个序列通过FASTX工具进行数据过滤，评估序列质量去除低质量序列和3’接头，5’接头和多A序列，计算小RNA长度分布[,]。余下的干净序列使用blast搜索比对到牡蛎基因组上[]。接着使用BLASTN将有意义的匹配序列比对到Rfam数据库[17]注释rRNA，tRNA，snRNA和其他ncRNA序列。剩下的小RNA比对到miRBase21中的后生动物成熟miRNAs库。一样或与参考的成熟miRNAs相关的序列被认为是保守miRNAs。没有匹配到任何数据库的序列被比对到牡蛎基因组用来预测新miRNAs。与牡蛎基因组没有任何差别的序列通过MIPEAP折叠来确定为潜在的新miRNAs。使用了如下法则来确定新miRNAs：碱基的数量为18到24，自由能≤-20kcal/mol，并且miRNA从一个前体端产生。Solexa测序在牡蛎比对中形成miRNA:miRNA*对被认为是miRNA*。2.2.4miRNA的鉴定与表达分析为了鉴定深度测序获取的miRNAs，我们随机选取了8个保守的和4个新的miRNAs，以5SrRNA为内参使用荧光定量PCR分析了他们在四个组织中的表达情况，总RNA使用miRcutemiRNAFirst-strandcDNASynthesisKit(TianGen,China)试剂盒来提取，定量液使用miRcutemiRNAqPCRDetectionKit(SYBRGreen;TianGen,China)，定量仪使用AppliedBiosystems7Real-TimePCRSystem(LifeTechnology,USA)，定量引物使用miRprimer软件[]设计，见表2-1。表2-1河蚬miRNA定量使用的引物miRNA forwardprimer(5’→3’)reverseprimer(5’→3’)5srRNAaagttaagcaacgtcgagcccttagcccagttgttaccagcacf-miR-cagtgccatttttatcagtcacggtccagtttttttttttttttacagcf-miR-12cgcagtgagtattacatcaggtggtccagtttttttttttttttcagtcf-miR-a cgcagtaatctcagctggt ggtccagtttttttttttttttcagaacf-miR-bcgcagtaatatcagctggtgtccagtttttttttttttttcaggacf-miR-67a gcagacaacctgcttgaatgggtccagtttttttttttttttcctcf-miR-cagtggacggagaactga ccagtttttttttttttttgcccttcf-miR-10gcagtaccctgtagatccgaaggtccagtttttttttttttttacaacf-novel-14tggcactggcggaa ggtccagtttttttttttttttgtgacf-novel-2cagacactgcgatctattgag gtccagtttttttttttttttcttagtccf-novel-18tgccctatccgtcagtcgtccagtttttttttttttttgcagcf-novel-31 gagctgcctgatgaagag tccagtttttttttttttttggaca2.2.5目的基因预测分析John等[]报道过的目的基因预测方法。尽管河蚬基因组和EST序列缺乏，但是有4个环境相关的基因全长(gst-pi,hsp70,cyp4andmetallothionein)可以从ncbi上获得，使用miRanda[]和RNAhybrid[]对miRNAs和这四个基因的3’非翻译区作了目标预测。2.3结果与分析2.3.1miRNA序列分析我们使用河蚬外套膜，肌肉，消化腺，性腺和鳃的RNA样品建立了一个小RNA库用来获取河蚬的miRNAs信息。过滤掉低质量的和接头序列，清楚污染的和短序列后，我们获得了28,,条高质量的reads。这些干净序列然后被映射到牡蛎基因组。得到了代表个序列的个高质量reads（表2-2）。去除掉rRNA,tRNA,snoRNA和其他ncRNA序列，剩下的reads（代表16个不同的reads）被用来预测保守的和潜在的新miRNAs（表2-2）。不同类型的小RNAs的数量和比例如表2-2。尺寸是一个重要的特征用来区分miRNAs和其他小RNA[]。miRNAs的尺寸一般是18到24bp[]。本次研究的小RNAs的尺寸分布如图2-1。我们发现绝大多数是22bp，占了总reads数的14.4%。同样地，在斑点叉尾（25.8%）[]和珍珠贝中（34.48%）[29]也是22bp的最多。图2-1高质量reads长度分布表2-2河蚬中不同类型小RNAs长度分布SmallRNA UniqueRNAsPercent(%) TotalRNAs Percent(%)Total 39, 6,, rRNA11,.,, 16.93tRNA 2, 5., 0.36snoRNA 19 0. 0.00other 10, 25.,.07miRNA16, 40.,, 80..3.2河蚬保守miRNAs确定为了确定河蚬保守的miRNAs，我们将测序数据比对到在miRBase21中的后生动物miRNAs库，允许有1到2个错配碱基[]。总共16个唯一的序列被比对到数据库。属于35个miRNAs家族的45个保守的miRNAs被鉴定出来（附录4）。此外，这些结果显示有26个保守的miRNAs超过0测序数。miR-10测得1366个拷贝数，是最多的，紧接着是miR-（），miR-（）和miR-7（322）（附录2）。在这些保守的miRNAs中，15个只有低于个拷贝数。miR-67a和miR-67b只被检测到1次。2.3.3河蚬新miRNAs的鉴定因为河蚬基因组信息未知，所以我们使用牡蛎基因组和河蚬EST数据库用来预测新miRNAs[]。44个符合规则的小RNAs被认为是潜在的新miRNAs。它们二级结构的自由能从?20.10到?99.00kcal/mol（附录3）。有28个新miRNAs被检测少于个拷贝，15个新miRNAs少于10个拷贝。预测的5个表达最高的miRNAs的二级结构如图2-2。图2-25个表达最高的新miRNAs预测二级结构2.3.4河蚬miRNAs的荧光定量为了检测河蚬潜在miRNAs的组织分布，我们使用荧光定量PCR检测不同miRNAs在不同组织中的表达水平。特别地，4个新的(Novel-2,Novel-14,Novel-18andNovel-31)和8个保守的(miR-10,miR-12,miR-67a,miR-,miR-a,miR-b,miR-andmiR-)（图2-3）miRNAs被检测了表达水平。结果显示9个miRNAs在腹足中表达量最高，然而miR-10和Novel-2在鳃和内脏团中表达量最高。此外，miR-在所有组织中表达相似。广泛的表达说明这个miRNAs肯与基础功能有关如代谢[]。相比较而言，一些miRNAs高度显示了组织特异性。miR-67a和miR-在腹足中最高，接着是外套膜，鳃和内脏团。此外，我们发现miR-12主要在腹足中表达，然后依次是内脏团，鳃和外套膜。miR-b主要在腹足和内脏团中表达而在鳃和外套膜中表达稀少。而且，miR-和miR-10表达水平在鳃，腹足和外套膜中几乎一样，在内脏团中明显低。而在新miRNAs中，Novel-14和Novel-18在腹足和外套膜中表达丰富，在鳃和内脏团表达量低。Novel-31在腹足中表达量最高，接着是外套膜和鳃，而在内脏团中非常低。Novel-2在鳃中很少表达，但在腹足外套膜和内脏团中表达高。图2-38个保守和4个新miRNAs在河蚬4个组织中（鳃，腹足，内脏团，外套膜）的表达水平2.3.5河蚬miRNAs目的基因的预测为了了解河蚬保守和新miRNAs的生物学功能，我们使用miRanda和RNAhybrid工具分析miRNAs和环境污染相关mRNA的关系。miRanda是一个基于核苷酸互补配对的miRNA目标基因预测软件，这款软件允许G=U假阳性，这在预测RNA:RNA复合体很关键[]。可以用于人，老鼠，苍蝇和蠕虫的序列预测[]。相比较而言，RNAhybrid是一款简单，快速并且灵活的任何物种miRNAs目的基因预测的软件[]。这个工具能预测miRNA和mRNA的最佳结合位点，能计算杂交结构自由能。结果显示所以的环境相关基因都有相应的miRNA作用（表2-3），metallothionein基因是miR-7的目标。miR-，miR-2b和Novel-40可能与调控河蚬hsp70有关。我们的结果还显示miR-10和miR-可以作用于cyp4的3’非翻译区。然而我们没有发现两个软件对gst-pi基因预测的交集。图4-4显示了使用miRanda和RNAhybrid预测miRNAs和它们的目的基因潜在的交联关系。图2-4miRanda和RNAhybrid预测miRNAs和它们的目的基因潜在的关系表2-3miRanda和RNAhybrid预测的河蚬miRNAs与gst-pi,hsp70,cyp4和metallothionein的关系Genes(geneID)miRandaRNAhybridConserved Novel ConservedNovelgst-pi(AY.1) miR-,miR-8a,miR-8bNovel-30,Novel-38miR- Novel-1*,Novel-4hsp70(KJ.1)miR-,miR-2a,miR-2b,miR-2c Novel-40 miR-,miR-2b,miR-34, Novel-29,Novel-40cyp4(JQ.2)miR-10,miR-,miR- Novel-30,Novel-15,Novel-23,Novel-36 miR-10,miR-,miR-,miR-,miR-a,miR-b,miR-34,miR-7 Novel-1*,Novel-14,Novel-17,Novel-29,Novel-3,Novel-4metallothionein(EF.1) miR-,miR-,miR-7, miR-7,miR-Novel-20,Novel-29,Novel-31,Novel-6a,Novel-6b,Novel-82.4讨论我们使用Solex测序技术获取了河蚬miRNAs数据，并进行了分析。发现保守的miRNAs表达比较高。之前的研究表明绝大多数确定的miRNAs的序列和功能在不同物种间是保守的[]。miR-10在河蚬中是表达量最高达，文献报道它能抑制斑马鱼HoxB1aandHoxB3a基因[]，DavidHassel等报道了它还可以通过促进血管内皮生长因子信号转导来调控斑马鱼和人血管内皮细胞的血管原行为[]。而且在其他几个物种中发现miR-10能与一系列Hox基因共表达，能调控Hox转录本的翻译[]。这些都将为以后研究河蚬miR-10的功能提供基础。Xu等[]报道了牡蛎中miR-b主要在消化腺中表达，接下来是鳃和外套膜。Wong等[]研究发现miR-的过量表达可能在细胞分化过程中引起舌鳞状细胞癌[]。组织分布结果表明绝大多数河蚬miRNAs主要在2或3个组织中表达，仅有少数miRNAs在多组织中高度表达。河蚬新miRNAs的表达量低，在珍珠贝中53个新miRNAs中只有3个测序数大于次[29]，此外，25个花生新miRNAs中只有5个检测频率大于0，绝大多数测序数小于[]。我们的结果与之前的研究是一致的[,]。新miRNAs的低丰度表达表明了它们在某些组织中或特定发育阶段中发挥作用。2.5本章小结在本研究中，我们使用Solex深度测序总共从河蚬小RNA库获得28条高质量序列。鉴定了45条保守的和39条新的河蚬。使用荧光定量PCR验证了8个保守的和4个新的miRNAs，发现它们在4个组织中表达各有差异。此外我们还是用了2种软件预测了miRNAs和4个环境污染相关基因的关系。本研究的结果为深入了解河蚬和其他双壳贝类的miRNA提供了基础。第三章河蚬CCK,Conopressin和FFamide神经肽基因cDNA全长克隆3.1引言目前，人，老鼠等脊椎动物的神经肽研究的比较成熟，无脊椎动物神经肽研究主要集中在海蜗牛，牡蛎，章鱼等海洋软体动物，没有淡水双壳类动物的文献报道，神经肽的毒理学研究也很少，开发河蚬典型神经肽标志物，并应用于毒理学研究十分必要。本研究选取了CCK,Conopressin和FFamide神经肽作为研究基因。本章以转录组测序获取的神经肽片段为参考，运用RACE技术，成功克隆了CCK,Conopressin和FFamide神经肽基因的全长，对全长序列进行了生物信息学分析，使用荧光定量PCR测量了神经肽在河蚬不同组织中的表达分布，并评估了有机磷酸酯对神经肽的影响，筛查了神经肽标志物。3.2材料与方法3.2.1实验材料3.2.1.1试剂TRIzol购自Invitrogen(USA）公司；荧光定量PCR试剂盒、琼脂糖、M-MLV试剂盒、Oligo-(dT）18、DNaseI和dNTP购自Promega（USA）公司；bp和bpladder购自天根生物（北京，中国）公司；SMARTRACEcDNAamplificationkit购自Clontech(USA）公司；TaKaRaMiniBESTAgaroseGelDNAExtractionKit,pMD20-Tvector和E.coliJM感受态细胞购自TaKaRa(Dalian,China）公司；三氯甲烷，异丙醇和无水乙醇都是国产分析纯。3.2.1.2实验仪器CentrifugeR离心机(eppendorf,USA）PowePacBasic电泳仪(BIO-RAD,USA）GelDocXR+凝胶成像仪(BIO-RAD,USA）梯度热循环仪（Veritithermalcyclesystem）（LifeTechnologies，USA）MultiskanGO酶标仪（ThermoScientific，USA）荧光定量PCR仪7Real-TimePCRsystem（LifeTechnologies，USA）3.2.1.3统计分析与绘图软件SPSS16.0软件，Origin8.0软件3.2.2河蚬的实验室养殖河蚬购自洪泽湖，在盱眙县老子山镇洪泽湖码头采集，壳长在1-3cm左右，年龄在1-2龄左右。带回实验室用恒温养殖系统进行驯养。采用流水养殖，建立一套恒温的流水系统进行养殖，选用水泥池流水循环系统养殖河蚬，以水泵提供流水动力，建有过滤池和养殖池，水经过水泵从过滤池传送到养殖池，再流回过滤池进行过滤。池底铺粒径为0.5mm左右的细沙，所用水为目纱绢过滤并充分曝气的自来水，室内温度使用空调控制，水温保持在20±1oC，水质硬度在mg/L以下,光照周期为12h：12h，饵料采用实验室纯培养的斜生栅藻和小球藻，或者以高级螺旋藻藻粉作为饵料。河蚬实验室养殖规范见附录1。3.2.3RNA提取和cDNA合成3.2.3.1.RNA提取操作步骤：河蚬组织总RNA的提取采用Trizol试剂法，在无菌和无RNA酶的超净工作台进行，具体操作步骤如下：(1)取50-mg河蚬组织迅速放入预冷的1.5mlEP管，迅速加入-μL冰预冷的Trizol液，然后用电动棒碾磨均匀，接着加入冰预冷的μLTrizol液，注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%，室温放置5min，使其充分裂解。(2)以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入冰预冷的氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒，室温放置3min，然后放入离心机，4℃，1转，离心15min，吸取上层水相，尽量不要将沉淀吸入，移至另一1.5mLEP管中。(3)每管加入uL冰预冷的异丙醇混匀，室温放置10min。(4)1g，4°C，离心10min，弃上清，此时RNA沉于管底。(5)用DEPC处理过的水和无水乙醇配制成75%乙醇，按每mlTrizol液加入至少1ml的比例加入75%冰预冷的乙醇，用手轻轻上下翻转约50次，用移液器反复吸吹悬浮的沉淀。(6)0g，4°C下离心5min，尽量弃上清。(7)室温瞭干，注意不要干燥过分，然后将RNA溶于无核酸水中。利用DNA的紫外分光光度计检测提取的RNA样品纯度和浓度。一般OD/OD.8时，样品纯度符合要求，其余的RNA于-80℃冻存，进行反转录合成。3.2.3.2.去除RNA中的DNA（1）用RNase-freeDNase去除样品中DNA污染。DNaseⅠ消化处理反应体系(20μL）RNA 16μLDNaseⅠ 2μL10×DNaseⅠBuffer 2μLTotalvolume20μL（2涡旋混匀后，37°C水浴30min。（3）加入RQ1DNaseStopSolution1μL，混匀，瞬时离心，65°C反应10min。（4）RNA浓度采用紫外分光光度计测定A/A大于1.8，其余的RNA于-80℃冻存，进行反转录合成。3.2.3.3.cDNA第一链的合成首先使用MultiskanGO酶标仪对提取并去除DNA污染的总RNA进行定量，使用Promega
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