PCR引物设计的原则

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　1、引物最好在模板cDNA的保守区内设计　　　　

DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。

　　　　　　2、引物长度一般在15~30碱基之间　　　　

引物长度（primerlength）常用的是18-27bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于TaqDNA聚合酶进行反应。

　　　　　　3、引物GC含量在40%~60%之间，Tm值最好接近72℃　　　　