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含反应混合液的离心管或试管在冰冻前都应快速离心数秒。 　　

主反应混合液的组成成份尤其是聚合酶的适用性和稳定性通过预试验来检查，评价结果必须有书面报告。

在整个本区的实验操作过程中，操作者必须戴手套，并经常更换。

严禁用嘴吸取液体，加样器和吸头等必须经高压处理。工作结束后必须立即对工作区进行清洁。

5标本制备区

正确使用加样器。由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。 　　

用过的加样器吸头必须放入专门的消毒容器内。实验室桌椅表面每次工作后都要清洁，实验材料如出现外溅，分别处理并作记录。对实验台适当的紫外照射(nm波长，与工作台面近距离)适合于灭活去污染。可移动紫外线管灯可用来确保工作后对实验台面的充分照射。样本处理对核酸扩增有很大影响，必须使用有效的核酸提取方法，可在开展临床标本检测前对提取方法进行评价。用于RNA扩增检测的样本制备好以后，应立即进行cDNA合成，因为cDNA链较RNA稳定，保存相对容易。为保证逆转录反应的需要，应在标本制备区设置一个以上的温育装置。

6cDNA合成的理想温度依所使用的酶而定，倾向于使用一步法：

即使用在扩增反应缓冲液条件下具有逆转录活性的热稳定的DNA聚合酶进行逆转录，其较cDNA合成后再开盖以调节缓液或加入聚合酶进行扩增发生污染的可能性降低。待测RNA的cDNA拷贝须保存在标本制备区，不得在本区对样本进行PCR扩增。

7扩增区

不能从本区再进入任何“上游”区域，可降低本区的气压以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的走动。如有加样则应在超净台内进行。打开预处理过的反应混合液时必须防止液体溅出，尤其是在巢式扩增步骤之间。一个简单的方法是在打开反应管前快速离心数秒。 　　

完成操作及每天工作后都必须对实验室台面进行清洁和消毒，紫外照射方法与前面区域相同。如有溶液溅出，必须处理并作出记录。

8扩增产物分析区

下述操作在本区内进行：扩增片段的测定。核酸扩增后产物的分析方法多种多样（如，膜上或微孔板上探针杂交方法、琼脂糖凝胶电泳等）目前国内的商品试剂盒绝大部分均采用非同位素标记的微孔板上探针杂交方法，PCR-ELISA方法，也有膜上探针杂交方法。注：本区是最主要的扩增产物污染来源，因此必须注意避免通过本区的物品及工作服将扩增产物带出。 　　

小结

严格按照实验室清洁卫生要求开展各类实验，是保证实验有效运行与实验员安全工作的前提。要不断完善实验室卫生管理体系，加强实验员的安全意识，保护员工的人身安全，确保实验室工作在清洁、安全、有序的条件下进行。

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