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引物使用的常见问题上
Q-1：OD值的概念？
A-1:OD是opticaldelnsity（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度。引物是以OD值来计量的。在1ml的1cm光程标准石英比色皿中，nm波长下吸光度为1的引物溶液定义为1OD。虽然对于每种特定的寡核苷酸来说，其碱基的组成不尽相同，但1OD引物的重量约为33ug，每个碱基的平均分子量约为Da。因此合成的引物摩尔数可按以下公式近似计算：摩尔数(mol)=[OD值*33]/[碱基数*]=0.1*[OD值/碱基数]。
Q-2：需要合成多少OD的引物？
A-2:一般来说，20BP2OD引物可以做-次50ul标准PCR反应，以及～2次的测序反应。因此，2OD的DNA量足以进行一般的实验工作。如果是做基因拼接或退火后做连接，1OD就足够了，无论是PAGE纯化，还是HPLC纯化，增大每次的纯化量会大大降低制品的纯度。为了保证制品质量，我们一般把每次的纯化量控制在2OD左右。
Q-3：如何测定引物的OD值?
A-3:DNA的量与nm处的吸光度值(OD值)成正比，因此使用紫外分光光度计定量是最科学的，测定时溶液的光密度最好稀释到0.2-1.0之间。进行OD值测定时，分光光度计上显示的数值为每毫升溶液中的OD值。例如：您拿到一管引物DNA干粉，用1ml水溶解成母液。取该母液50μL稀释成1ml，在1ml标准比色杯中测定其吸光度为0.25，说明该50μL中含有0.25OD的DNA，也即说明原来1ml母液中含有5OD的DNA。
Q-4：最长可以合成多长的引物？
A-4:我们最长可合成base的引物，但引物越长，出现问题的概率就越大，我们建议合成片段长度不要超过80mer，除非有特殊需要。
Q-5：当引物的OD/OD小于1.8时，引物的纯度合格吗？
Q-5：OD/OD的比值不能用来衡量引物的纯度。OD/OD的比值过低一般是由于引物中C/T的含量比较高所致。下表是一个20碱基同聚体引物的OD/OD的比值，清楚表明OD/OD的比值与引物的碱基组成密切相关。
Q-6：是否可根据引物电泳后EB染色后条带的亮度对合成的引物进行定量?
A-6:不能，EB是通过嵌入到核酸的双螺旋间而使其着色的。合成的DNA分子为单链，只有通过自身回折形成局部发夹环结构或链间形成部分双螺旋结构，才能被EB染色。由于不同引物的序列不同，形成双螺旋的能力不同，因此染色能力不尽相同，也就不能根据EB染色带的亮度来对合成的DNA进行定量。建议用紫外分光光度计的方法如上面题Q-3中的方法。
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