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细说动物基因工程小鼠的品系管理及基因型鉴
实验室基因工程小鼠品系的保存大多是通过和野生型小鼠交配，然后不断鉴定、选择携带基因突变或转基因的后代来实现。因此，维持一个基因工程小鼠品系，必须要通过分子生物学手段不断的鉴定小鼠的基因型。今天我们就来看看是如何进行管理以及鉴定的。
PCR鉴定以基因剔除小鼠为例，一般我们需要设计两组不同的PCR引物，分别用于扩增野生型小鼠和突变型小鼠的基因组DNA片段：
1用于扩增野生型基因组DNA的两个PCR引物至少有一个来自于被剔除的区域DNA序列，这样对于基因剔除小鼠纯合子个体基因组DNA，利用这对引物将无法得到扩增产物；
2扩增突变型小鼠基因组DNA，我们一般在被剔除片段的两端设计PCR引物。
由于被剔除的片段大多有成百上千个碱基，这样通过PCR产物大小可以明显区分突变型小鼠和野生型小鼠来源的DNA片段(野生型小鼠相应片段常常由于过长而不被扩增)。
一般来说，用于基因型鉴定的PCR产物大多在-bp左右，最好能将野生型基因鉴定PCR产物大小和突变型基因鉴定PCR产物大小分开，这样在观察电泳结果时可以一目了然。
值得一提的是，有些实验室常常使用针对Neo(neomycinresistantgene)序列的通用PCR引物鉴定经典基因剔除小鼠。如果该实验室只有一两种基因剔除品系，这样做是可以的。但是当实验室同时饲养多个品系时，这种方法很可能会导致品系之间的基因型鉴定结果的交叉污染，所以我们还是建议使用品系特异的PCR引物对基因剔除小鼠进行基因型鉴定。
动物管理遗传工程小鼠品系的个体动物管理和记录也是非常重要的，因此笼盒标牌上一般要标注至少品系名、小鼠编号、基因型、性别、出生日期和品系管理人等信息。和普通小鼠不同，每个遗传工程小鼠均有其唯一编号。目前对小鼠编号有许多方法，如在耳朵和脚趾剪记号等，大型实验动物设施也可以采用皮下植入条码的方法。
基于简单易行的原则,我们实验室目前还是采用剪脚趾对小鼠进行编号。这个方法可以将编号1到99的小鼠区分开来，对于编号大于的小鼠，我们可以在笼盒的标牌上注明。具体标注见下图(腹面观)：
DNA提取提取鼠尾DNA的方法有很多种，以下是我们实验室采用的两种方法。其中高盐提取法快捷，但提取的DNA质量有时不能满足特定品系鉴定的需要。这时可以改用酚/氯仿法提取。
(A)酚/氯仿提取法▼第一天
●1.剪取0.5cm鼠尾(同样适用于脚趾，胚胎组织，卵黄膜等)，放入1.5ml离心管。
●2.按uldigestionbuffer+5ul蛋白酶K的比例，配制鼠尾消化液。
●3.将保存液每管ul加入离心管，5℃的水浴中，消化过夜。
▼第二天
●4.用劲将消化好的组织摇匀。
●5.每管加入ul酚/氯仿(1:1，事先配好，4℃保存)。
●6.混匀，离心，r/min，10min。
●7.转移ul上清液至新的标记好的1.5ml离心管内(注意：吸取上清液时，可将大枪头的尖端剪去，减少吸力可避免将中间蛋白吸起。不能将中间的蛋白层吸起来,否则会对后续的实验造成影响！)。
●8.加入ul无水乙醇(2倍于上清液的体积)，上下颠倒混匀，此时应可看到色丝状的DNA。
●9.离心，r/min，5min，弃去上清液。
●10.加入ul70%乙醇。
●11.离心,r/min，5min，弃去上清液。
●12.晾干，30min(注意：不能用DNAPlus真空抽干,这样可能会导致基因组DNA难溶)。
●13.加入ulTE,可放入37℃助溶。
●14.短期4℃保存,长期-20℃保存。
(B)高盐提取法▼第一天
●同酚/氯仿提取法
▼第二天
●1.用劲将消化好的组织摇匀。
●2.加入ul(1/2消化液的体积)饱和氯化钠溶液。
●3.混匀，离心，r/min，10min。此时会见到很多白色的沉淀，这些都是蛋白沉淀。
●4.转移ul上清液至新的标记好的1.5ml离心管内。
●5.加入ul无水乙醇(2倍于上清液的体积)，上下颠倒混匀，此时应可看到白色丝状的DNA。
●6.离心，r/min，5min，弃去上清液。
●7.加入ul70%乙醇。
●8.离心，r/min，5min，弃去上清液。
●9.晾干，30min(注意：不能用DNA-Plus真空抽干，这样可能会导致基因组DNA难溶)。
●10.加入ulTE，可放入37℃助溶。
●11.短期4℃保存，长期-20℃保存。
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