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科学360第十六期Thermo荧光
生物材料由许多化学键组成，随着温度的升高，材料内能增加同时化学键断裂。这种因化学键断裂而导致生物材料结构改变的现象被称作热变性。此外，最活跃时的变性温度被称为熔解温度。熔解温度是用于表征材料稳定性的指标之一。
寡核苷酸是一种遗传物质，由多组碱基构成。寡核苷酸可以很容易地和它们的互补对链接，所以常用来作为探针确定DNA或RNA的结构，经常用于基因芯片、电泳、荧光杂交等过程中。
本实验采用ThermoFisher公司的lumina荧光分光光度计配备Peltier温控系统对不同温度下的荧光性能进行了测量。Peltier温控系统可快速精准地对温度进行调节，温度范围可控制在-10℃到℃。该系统有样品除霜功能、磁力搅拌功能和温控功能。本研究采用Lumina和Peltier系统，结合荧光标记，研究了寡核苷酸荧光强度与温度的关系。最终根据一阶导数分析熔点曲线并计算出了TM值。
如图1所示，我们将AlexaFluor?荧光探针标记在寡核苷酸的5′端部，将AlexaFluor?荧光探针连接在另一端。
实验步骤
1.添加10ml的Tris-EDTA缓冲液（pH8.0）到两根塑料管中，形成浓度分别为mM（供体）和
mM（受体）的NaCl溶液。
2.在上述缓冲液中溶解供体/受体寡核苷酸，使浓度变为nM。
3.混合已制备的供体试剂和受体试剂，然后在室温下培养5分钟。
4.将Peltier系统安装在Lumina上。
5.打开Luminous的Thermal软件，如图3输入预定参数。使用软件（Excel?,Origin?等）根据供体各测量点数据计算一阶导数，并在测量后查看TM值。
实验结果
FRET现象是供体到受体的一种能量转移现象，这是由于荧光物质受热前荧光探针间距离较短造成的。因此，在供体激发波长nm处发出较弱的荧光，在受体的激发波长nm处发出较强的荧光。另一方面，随着受热产生的热变性现象，与FRET现象相反。换句话说，荧光在nm时较强，而在nm时较弱.
如图5所示，我们绘制了供体、受体荧光强度与温度的关系。可以确认，供体和受体上发生的荧光强度逆转的情况是由于FRET现象消失导致的。
目前有多种方法可以确定TM值，本实验中我们通过一阶导数的峰值来确定TM值。本次试验所用寡核苷酸的TM值为49℃。（图6）
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