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基因扩增仪PCR
PCR是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内InVitro的大量合成,它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准,可以将PCR仪分为普通PCR仪,梯度PCR仪,原位PCR仪,实时荧光定量PCR仪四类。
PCR技术原理该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下,依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板,借助一小段双链DNA来启动合成,通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合,形成部分双链。在适宜的温度和环境下,DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3′-OH末端,并以此为起始点,沿模板5′→3′方向延伸,合成一条新的DNA互补链。PCR反应步骤分别是1.变性,2.引物退火,3.引物延伸。所谓变性是将DNA加热至90-95℃变性,将双链DNA加热后转为单链DNA做为复制的模板.而引物退火则是引物于一定的温度下(冷却至55-60℃)附着于模板DNA两端。最后在DNA聚合酶的作用下(加热至70-75℃)进行引物的延伸及另一链的合成。
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