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不会设计引物肿么破来这里呀

老板喊你做PCR了！！！话说有一天晚上，boss张看见小编在操场闲逛，于是第二天小编就被召唤了，“快回来做实验，不要老是去压操场啊”哈哈哈，大家说说boss张逗不逗。于是就有后面的故事了....

做PCR？？？？这是什么鬼啊！实验室的蒙奇奇告诉小编，就是聚合酶链式反应啊！来吧让蒙奇奇告诉大家怎么设计引物做PCR，进入主题了不编故事了。

相信刚进入研究生生活的菜鸟们很恼火，到底怎么设计引物啊，相信你看了这个干货之后就明白了哈哈哈。引物（primer），就是一小段单链DNA或RNA，是DNA复制的起点，有了这个小小的引物才能延伸出我们需要的DNA序列（小小的东西往往发挥穿针引线的作用）。现在设计引物有很多种方法，比如各种软件DNAman、Primer5.0、Snapgene、NCBIWebTool等，这期主要讲述用NCBIWebTool这个在线数据库设计引物。

首先你要下载自己要P的序列，当然了有很多的数据库可以选择，比如NCBI、Photozome、MaizeSeq（玉米研究）。下面以fea2这个有关玉米穗突变的基因为例来说明整个过程：

首先进入phytozome,首先输入基因ID，物种选择，点击GO

点击进入之后，延伸序列的上下游（这里延伸长度按照实际情况选择）

之后进入NCBI主页点击Blast

接着点击PrimerBlast

粘贴以得到的序列，修改引物结合范围，例如这个fea2这个基因长bp，上下延伸bp之后，上游引物结合位置为1-，下游结合位置为+到；修改相应的产物大小

数据库的选择还有物种的选择

得到了10对引物序列，我们要选择结合位点好，GC含量适当的引物,3’末端是A或者T的引物最好不要选择

按照一下格式将所有引物序列粘贴到Word中

打开gramene，将上述序列粘贴到指定位置

选择物种，修改E值

点击run，一切都搞定，选择我们需要的引物，可以无忧无虑的做PCR了