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RTPCRQPCRRealtim
多少同学能将RT-PCR、Realtime-PCR、QPCR区分开?有多少同学还在犯晕?
今儿这贴,师兄就带你区分区分,拨开那扇PCR迷雾。
什么是RT-PCR?RT-PCR就是逆转录PCR(reversetranscriptionPCR)或者称反转录PCR(reversetranscription-PCR,RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。
那什么是qPCR、Real-time-PCR?其实Rea-time-PCR和qPCR(QuantitativeRea-time-PCR)是一码事,都是实时定量PCR,指的是PCR过程中每个循环都有数据的实时记录,因此可以对起始模板数量进行精确的分析。
虽然Real-timePCR(实时荧光定量PCR)和ReversetranscriptionPCR(反转录PCR)看起来都可以缩写为RT-PCR,但是,国际上的约定俗成的是:RT-PCR特指反转录PCR,而Real-timePCR一般缩写为qPCR(quantitativereal-timePCR)。
那什么是real-timeRT-PCR(或RT-qPCR)?real-timeRT-PCR中间的「RT」是reversetranscription(逆转录),整个意思就是利用mRNA或总RNA为模板的实时逆转录PCR技术(quantitativeReal-timeRT-PCR)。realtimeRT-PCR指的是qPCR+RT-PCR的组合,是说将mRNA逆转录为cDNA后再作为模板进行实时荧光PCR分析,因为RT-PCR是可以定性的,但不能进行定量检测的。
所以不难理解real-timeRT-PCR(RT-qPCR)就是结合了荧光定量技术的反转录PCR:先从RNA反转录得到cDNA(RT),然后再用Real-timePCR进行定量分析(qPCR)。
所以,实时荧光定量PCR,它不仅可以用cDNA作为模板,也可以用基因组DNA等作为模板。
有时候搞清楚这些概念也很重要,你分清了吗?
作者:大师兄
图片来源:网络
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