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引物使用的常见问题下
Q-7：引物定量不准的可能原因有：
我们偶尔收到用户投诉定量不准的报告，出现这种情况的可能性有：
（1）生产人员定量错误。这种可能性有，但是不大，因为我们的生产人员都是经过严格的培训，程序化规范操作和换算。公司内部的考核机制也使得分装人员没有必要故意少给用户OD数。
（2）引物抽干或收样过程中，引物干粉可能意外丢失。这种情况很少见。
（3）系统误差，我们认为10%左右为允许误差。使用过程中，引物工作浓度范围很宽，定量上的少许偏差不影响实验。
（4）用户没有能够正确理解引物OD数的含义，没有能够正确使用分光光度计，特别是使用微量测定；或者用户没有将OD读数，正确地转换成母液中的OD数。这种情况比较常见。（5）用户收到引物干粉时，打开引物管盖前没有离心或其他误操作导致引物干粉部分丢失。
Q-8:用3%的琼脂糖凝胶电泳合成的引物，为什么有很多条带？
Q-8:引物是单链DNA，容易形成复杂的立体结构，因此进行琼脂糖电泳时，容易出现多条泳带（更不能用琼脂糖电泳来进行定量了）。OligoDNA的电泳一定要使用变性PAGE电泳，琼脂糖电泳对于小单链的DNA引物的区分度不够。而且，用荧光TLC板在紫外灯下观察，在主带之下没有杂带，说明纯度是好的。如果条件许可，也可以用银染方式染色。
Q-9:引物溶解后发现有少许沉淀，会影响实验结果吗?
A-9：DNA制品使用C18柱进行吸附，偶而会有微量的树脂溢出而进入制品。树脂不影响任何反应结果，请稍许离心后取上清使用即可。
Q-10：进行PAGE电泳时，长度完全一样的OligoDNA为什么泳带不在同一位置?
A-10：A、G、C、T的组份不同，电泳速度不同；DNA的立体结构不同，电泳速度不同；OligoDNA越短时越容易发生，长链OligoDNA之间差别较小
Q-11：合成引物的5’和3’末端有磷酸基团吗?
Q-11:5’和3’端均为-OH基。如需要加磷酸基团，订货时请特别注明，此时需收取磷酸化的费用。
Q-12：PCR扩增不出来，跟引物有关吗？
A-12:基本上不是。当今发展出各色各样的PCR扩增技术，各色各样的高温聚合酶，就是来解决PCR扩增中遇到的扩不出，扩增效率低的问题。如槽式PCR就是扩增那些拷贝数很低的基因片段。有些重复片段、GC含量高的片段扩增，必须采用特殊扩增手段才能扩增出来。
扩增不出，主要是下列两种情况比较常见：1)RT-PCR。很多基因通过常规RT-PCR方法是很难扩增出来的。RT-PCR成功的关键在于RT反应的RNA质量和目标基因在特定组织和细胞中的含量。2)从基因组中扩增。一般情况下，基因在基因组中都是单拷贝，基因组作为模板需要严格控制用量。基因组DNA过高，会影响反应体系中的Mg2+浓度和pH。
Q-13:如何溶解并保存引物？
Q-13:客户收到的引物干粉，经过一系列处理和纯化步骤，旋转干燥而成片状物质。干燥的引物在常温至少可以稳定存放二周以上不会降解，由于干燥后的引物质地非常疏松，开盖前最好在-转/分的转速下离心1分钟，防止开盖时引物散失。我们的的合成报告单给出了每OD引物稀释为μmol/L（即pmol/ul）浓度的加水量，您可以根椐您的实验需要加入适量的灭菌的双蒸水或10mMTE缓冲液（PH7.5-8.0），室温放置几分钟，上下颠倒混匀后分装成小份放-20℃冰箱储存。如果对实验的重复性要求较高，合成的OD数较大，建议分装，避免反复冻融。修饰荧光引物需要避光保存。
Q-14:如何将两条互补的单链退火形成双链？
Q-14:用退火缓冲液(10mMTris,pH7.5-8.0,50mMNaCl,1mMEDTA)溶解引物，退火的引物等摩尔数混合，总体积不要超过微升，加热到95℃2mins，然后缓慢冷却至室温(低于30℃)即可。退火的产物可以放在4℃待用。
Q-15.已经溶解的引物，为什么原先使用正常，而过一段时间再使用就不好了？
Q-15：如果您溶解引物的水PH过低或污染了菌或核酸酶，会使引物降解。使用时没有充分解冻混合，液体不均匀也可能会造成引物加入量不准确。建议分装引物，避免反复冻融，并使用10mMTrispH7.5缓冲液溶解引物。还有一种可能性是引物没有问题，而是PCR使用材料特别是模板的质量与先前使用的不完全一致。
