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行引物设计最核心的秘密
说起引物设计,我也走过一些弯路。在各种生物网站上,我找了很多相关引物设计的文章,包括原则、步骤、注意事项等等,然并卵。尤其是对新手来说,很多概念并不清楚,所以很痛苦。回顾过去的历程,总结出几点,与大家分享。
1.自己琢磨百遍不如师姐教你1遍。这是真理。因为大部分刚进实验室的都很浮躁,不太会有人静下心来将PCR的原理吃透。而引物设计其实暗藏功底。找个师姐,也教会你,回来再来理解这些会容易些。勤快一些,嘴巴甜一些,教你应该问题不大。
2.引物设计里会提到引物长度、发夹结构、二聚体、GC含量等,因为这些会影响到扩增效果。其实我个人实践得出的结论是,未必。我每次都设计10组引物,然后分别PCR,发现即使不符合这些规则,依旧能拿到产物。所以,规则是死的,PCR有条带才是王道。
3.按照前面一篇文章的图解步骤,你应该能学会如何用软甲设计引物。熟练之后,只要对着基因的前20个左右和后20个左右基因序列。就能快速设计出引物。如果有需要,可以加我的小号(babagowhere)。
4.引物设计没那么难,勇敢地去尝试。难的是你即使引物都设计对了,也不一定能P出条带。除了运气,建议你可以一次多设计些引物,提高成功概率。
今天就写到这里,希望你们会喜欢。11月我还会推出分子生物学公开课,
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作者:霸霸
配图来源:丁香园图库
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