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克隆不想花钱,那就戳这里
研究某个gene的功能通常要做相关的功能实验,常用的手段有gain-of-function,涉及gene的过表达,在下文中即将讲述;还有loss-of-function,通常涉及gene的knock-out或konck-down,暂且不提。
今天准备跟大家分享一下如何成功地用传统酶切酶连的方法克隆某gene的经验,虽然现在同源重组的方法已经越来越广泛地应用到科研中,属于technologybasedinnovation,给实验带来极大便利。
但是传统的克隆方法还是占主要地位,尤其是新兴的方法如果要做gain-of-function仍然逃避不了克隆gene片段这个步骤,打好相关的基础,掌握其中原理才能在各种tools出现时及时掌握并灵活应用。
接下来讲述基因克隆的流程
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首先获得某基因的序列
在pubmed主页下拉框选定Gene或者Nucleotide,然后在输入框输入基因名称如Znf点击search后,进入(如图1)。
在左边分类Sequencecontent里选择CCDS(如图2),在右侧选择种属Musmusculus(如图3),这样就只会显示此基因的CDS结果。而页面加载出来后会有很多Znf相关的信息包括基因名,全称,在chromosome上的位置及其相邻的基因有哪些,目前已知的此基因相关文献报道,可以忽略这些信息(当然也可以留意一下自己比较白癜风早期能根治吗最好白癜风专科医院