复旦女教授陈果我自风情万种,与世无争

最近，朋友圈掀起一股复旦女教授陈果讲课视频的狂潮！

陈果是谁？

让我们来了解一下：

“陈果”，上海复旦大学的哲学博士、副教授，现任复旦大学“思想道德修养与法律基础课”教师。

是的，简单直接一点就是：复旦大学的大学老师！

我们先来看一下陈果的讲课视频！

1

陈果老师谈-[自信]

陈果老师在视频里面讲到什么是自信：

自信是什么，自信是自己喜欢自己，自己信自己，自己认可自己。而不是别人信自己，别人认可自己，别人信自己那叫做他信，而不是自信。她讲到她朋友所说过的一句话：我自风情万种，与世无争！什么叫做我自风情万种，与世无争？在不干扰别人的情况下，在不给别人带来麻烦的情况下，我们真的不需要太在意别人的想法。

只要你不干扰别人，不影响到别人，不给别人带来麻烦，随你怎么变态，随你怎么做你自己。都和别人没有任何关系。但是如果你的行为影响到别人，干扰到别人，或者是不道德，这是不行的。所以说，我自风情万种，与世无争的前提是：不影响别人，不干扰到别人，不会不道德。随你做你自己。

所以说，活的帅气一点，从容一点，自然一点，真实一点，快乐一点。你会更加自信，更加快乐。

几年前有人问她，别人喜欢自己和自己喜欢自己哪个更加重要？她当年的回答是两个都重要。但现在她说：如果在两者不能兼顾的情况下，自己喜欢自己更加重要。因为我们要了解一个真相，不管你有多优秀，多完美总有人不喜欢你，总有人讨厌你。同样，不管你多么不好，多么不堪，多么糟糕，还是有人喜欢我们。

事实证明，不管你活成什么样子，还会有人喜欢你，有人不喜欢你。但是当我们活成我们自己时，不喜欢的人当中多了一个人喜欢我们自己，那个人自己我们自己。所以我们要活出我们自己。不要成为任何人眼里的任何人。我就是我。能使我感到真正快乐自信的那个我，就是真正的我。

人都有缺点，再完美的人都有缺点，所以要接受真实的自己。当我们自己喜欢自己时，我们身上就自然而然会散发出一种自信，散发出一种自由，一种个人独特魅力。

所谓自信，你得活出真实的自我，得自己喜欢现在的你自己，自己认可你自己，自己爱现在的自己。你就能做到自信。

2

陈果老师谈-[优雅]

陈果老师在视频里面讲到什么是优雅：

大家谈到优雅，都是不由自主的心身向往。但什么是真正的优雅呢？优雅并不是你穿多贵的衣服，不是你克制你内心真正的自己，做一些违背自己意愿装模作样表面看起来好看的动作。而是你尊从你内心时举手投足之间所散发的气质，散发的自信。所以说，只要你活的自信了，快乐了。你的身体就自然而然散发出一种魅力了。

香奈儿有一句话：原形自如，变是一种优雅！是的，优雅跟你穿什么衣服真的没什么关系！重要的是你身体本身散发的气质魅力。你就算穿件白衬衫，你也能穿出你自己的优雅味道。

当你活成你自己时，你身体就会散发出一种自信，自由，一种感染力。而且是一种正能量的感染力。你不必去说教别人，别人就自然而然被你感染了，你本身自带的自信光环就照亮了别人，温暖了别人。当你活成一束光，自信，自由，你就会散发出一种优雅。

怎么样才能找到自己好友？物以类聚，人以群分。你想要什么好友，你就得活成什么一种的人，你的先成为那样子的人。你想要散发光环的好友，你的成为散发光环的人。你想要真诚的好友，你的自己先成为真诚的人。因为，只有相同的人，才能相互识别。你是什么样的人，你就会吸引来什么样子的人。你是什么样子的人，你就会被什么样子的人所吸引。

一个活成你自己的人，一定是很爱自己的人。当你对着镜子微笑时，你是在对全世界微笑。因为你爱这个世界，是这个世界让你成为了最爱的自己。你爱这个世界，世界就会爱你。同样，你厌倦这个世界，世界也会同样对待你。

所谓优雅，就是你尊从内心活成你自己的幸福快乐的样子。

3

陈果老师谈-[幸福]

陈果老师在视频里面讲到什么是幸福：

幸福跟钱真的没什么太大的关系，有钱不一定幸福，没钱也不一定幸福。这并不是心灵鸡汤，而是一个客观事实。如果你有钱也不幸福，那你得好好思考一下自己的人生了。我们所做的一切，都是为了让我们更加幸福，更加快乐。我们赚钱是为了让自己生活的更好，生活的更好是为了更快乐更幸福。我们所做的事情终极目标都是为了使自己更幸福，使更多的人幸福。

人生只有两件事有意义：第一是让自己幸福，第二是让更多的人幸福。人生只有两件事最重要：第一是让自己好好活着，第二是让更多的人好号活着。希望大家活到生命的最后一刻，对自己的一生总结是，我幸福快乐的度过了这一生。

是的，如果说你现在做的事情终极目标不是带你走向幸福，那么它毫无意义，如果说，你现在所做的事情最终给你带来幸福快乐，那么这件事就是对的。所以，我做每一件事，终极目标都是为了让自己快乐。让更多的人快乐。

所谓幸福，就是做让你感到快乐的事。

我愿活成真实的自己：我自风情万种，与世无争！

陈果，讲起课来，一手夹着粉笔，一手插裤袋，霸气侧漏、侃侃而谈。身高超过1米7，衣着时尚，偶尔还客串一把杂志平面模特。这是多么有趣又散发正能量的一个人。

学过拉丁，走路像模特一样高雅，一出现在校园，校园就一立马变舞台。

她就是陈果。

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打赏

摘在生态毒理学受试生物研究上，国内外已经开发了多种受试生物品种，如斑马鱼，大型溞，浮萍，虹鳟，牡蛎，稀有鮈鲫和青鳉等[-]，但是关于淡水双壳类底栖生物的报道很少，河蚬作为中国本土的底栖物种，分布广，敏感性强，易取样，能直接反映水污染现状。本研究通过Illumina测序技术获取河蚬miRNAs信息，为研究miRNA在环境毒理学上的应用提供了基础。利用RACE技术，克隆典型河蚬肠促胰酶肽（Cholecystokinin），Conopressin神经肽和FF神经肽基因，并进一步选取了具有神经毒性的污染物有机磷酸酯，筛查敏感的神经肽标志物，为神经肽的毒理学研究与应用提供了科学依据。使用转录组测序技术评估TDCPP和TBP对河蚬内脏团的毒理机制，为我国对TDCPP和TBP的风险评估提供依据。本论文的技术路线如图1-1。图1-1本论文的技术路线?第二章基于Solexa技术的河蚬保守和新microRNA的鉴定与特征分析2.1引言河蚬作为我国本土淡水贝类是生态毒理学研究的优势物种，陈辉辉等[]通过转录制测序发现了一些环境标志物基因，如cyp30,hsp70,GABARAP,TPX1,和SOD。但是目前还没有河蚬环境相关miRNAs的报道。因此在本研究中，我们使用Solexa测序技术鉴定了河蚬中的miRNAs。此外还使用荧光定量PCR测定了特定miRNA转录本在不同组织中的表达情况，两种法则被用来预测miRNAs的潜在目标，本研究提供了河蚬miRNAs数据，为以后研究河蚬miRNAs的生物学功能和进化提供了技术。2.2材料和方法2.2.1河蚬的养殖河蚬取自洪泽湖，养殖方法见附录12.2.2miRNA的提取与测序首先使用天根miRcutemiRNA提取分离试剂盒对河蚬miRNA进行提取，然后在3’和5’接头加上测序序列，接着进行反转，建库，PCR扩增，使用聚丙烯酰胺凝胶分离纯化-nt的小RNA，加接头，最后上机测序。提取与测序流程如图2-1。图2-1miRNA库建立与测序2.2.3miRNA测序数据生物信息学分析由Solexa测序产生的单个序列通过FASTX工具进行数据过滤，评估序列质量去除低质量序列和3’接头，5’接头和多A序列，计算小RNA长度分布[,]。余下的干净序列使用blast搜索比对到牡蛎基因组上[]。接着使用BLASTN将有意义的匹配序列比对到Rfam数据库[17]注释rRNA，tRNA，snRNA和其他ncRNA序列。剩下的小RNA比对到miRBase21中的后生动物成熟miRNAs库。一样或与参考的成熟miRNAs相关的序列被认为是保守miRNAs。没有匹配到任何数据库的序列被比对到牡蛎基因组用来预测新miRNAs。与牡蛎基因组没有任何差别的序列通过MIPEAP折叠来确定为潜在的新miRNAs。使用了如下法则来确定新miRNAs：碱基的数量为18到24，自由能≤-20kcal/mol，并且miRNA从一个前体端产生。Solexa测序在牡蛎比对中形成miRNA:miRNA*对被认为是miRNA*。2.2.4miRNA的鉴定与表达分析为了鉴定深度测序获取的miRNAs，我们随机选取了8个保守的和4个新的miRNAs，以5SrRNA为内参使用荧光定量PCR分析了他们在四个组织中的表达情况，总RNA使用miRcutemiRNAFirst-strandcDNASynthesisKit(TianGen,China)试剂盒来提取，定量液使用miRcutemiRNAqPCRDetectionKit(SYBRGreen;TianGen,China)，定量仪使用AppliedBiosystemsReal-TimePCRSystem(LifeTechnology,USA)，定量引物使用miRprimer软件[]设计，见表2-1。表2-1河蚬miRNA定量使用的引物miRNA　　forwardprimer(5’→3’)reverseprimer(5’→3’)5srRNAaagttaagcaacgtcgagcccttagcccagttgttaccagcacf-miR-cagtgccatttttatcagtcacggtccagtttttttttttttttacagcf-miR-12cgcagtgagtattacatcaggtggtccagtttttttttttttttcagtcf-miR-a　　cgcagtaatctcagctggt　　ggtccagtttttttttttttttcagaacf-miR-bcgcagtaatatcagctggtgtccagtttttttttttttttcaggacf-miR-67a　　gcagacaacctgcttgaatgggtccagtttttttttttttttcctcf-miR-cagtggacggagaactga　　ccagtttttttttttttttgcccttcf-miR-10gcagtaccctgtagatccgaaggtccagtttttttttttttttacaacf-novel-14tggcactggcggaa　　ggtccagtttttttttttttttgtgacf-novel-2cagacactgcgatctattgag　　gtccagtttttttttttttttcttagtccf-novel-18tgccctatccgtcagtcgtccagtttttttttttttttgcagcf-novel-31　　gagctgcctgatgaagag　　tccagtttttttttttttttggaca2.2.5目的基因预测分析John等[]报道过的目的基因预测方法。尽管河蚬基因组和EST序列缺乏，但是有4个环境相关的基因全长(gst-pi,hsp70,cyp4andmetallothionein)可以从ncbi上获得，使用miRanda[]和RNAhybrid[]对miRNAs和这四个基因的3’非翻译区作了目标预测。2.3结果与分析2.3.1miRNA序列分析我们使用河蚬外套膜，肌肉，消化腺，性腺和鳃的RNA样品建立了一个小RNA库用来获取河蚬的miRNAs信息。过滤掉低质量的和接头序列，清楚污染的和短序列后，我们获得了28,,条高质量的reads。这些干净序列然后被映射到牡蛎基因组。得到了代表个序列的个高质量reads（表2-2）。去除掉rRNA,tRNA,snoRNA和其他ncRNA序列，剩下的reads（代表16个不同的reads）被用来预测保守的和潜在的新miRNAs（表2-2）。不同类型的小RNAs的数量和比例如表2-2。尺寸是一个重要的特征用来区分miRNAs和其他小RNA[]。miRNAs的尺寸一般是18到24bp[]。本次研究的小RNAs的尺寸分布如图2-1。我们发现绝大多数是22bp，占了总reads数的14.4%。同样地，在斑点叉尾（25.8%）[]和珍珠贝中（34.48%）[29]也是22bp的最多。图2-1高质量reads长度分布表2-2河蚬中不同类型小RNAs长度分布SmallRNA　　UniqueRNAsPercent(%)　　TotalRNAs　　Percent(%)Total　　39,　　　　6,,　　rRNA11,.,,　　16.93tRNA　　2,　　5.,　　0.36snoRNA　　19　　0.　　0.00other　　10,　　25.,.07miRNA16,　　40.,,　　80..3.2河蚬保守miRNAs确定为了确定河蚬保守的miRNAs，我们将测序数据比对到在miRBase21中的后生动物miRNAs库，允许有1到2个错配碱基[]。总共16个唯一的序列被比对到数据库。属于35个miRNAs家族的45个保守的miRNAs被鉴定出来（附录4）。此外，这些结果显示有26个保守的miRNAs超过0测序数。miR-10测得1366个拷贝数，是最多的，紧接着是miR-（），miR-（）和miR-7（322）（附录2）。在这些保守的miRNAs中，15个只有低于个拷贝数。miR-67a和miR-67b只被检测到1次。2.3.3河蚬新miRNAs的鉴定因为河蚬基因组信息未知，所以我们使用牡蛎基因组和河蚬EST数据库用来预测新miRNAs[]。44个符合规则的小RNAs被认为是潜在的新miRNAs。它们二级结构的自由能从?20.10到?99.00kcal/mol（附录3）。有28个新miRNAs被检测少于个拷贝，15个新miRNAs少于10个拷贝。预测的5个表达最高的miRNAs的二级结构如图2-2。图2-25个表达最高的新miRNAs预测二级结构2.3.4河蚬miRNAs的荧光定量为了检测河蚬潜在miRNAs的组织分布，我们使用荧光定量PCR检测不同miRNAs在不同组织中的表达水平。特别地，4个新的(Novel-2,Novel-14,Novel-18andNovel-31)和8个保守的(miR-10,miR-12,miR-67a,miR-,miR-a,miR-b,miR-andmiR-)（图2-3）miRNAs被检测了表达水平。结果显示9个miRNAs在腹足中表达量最高，然而miR-10和Novel-2在鳃和内脏团中表达量最高。此外，miR-在所有组织中表达相似。广泛的表达说明这个miRNAs肯与基础功能有关如代谢[]。相比较而言，一些miRNAs高度显示了组织特异性。miR-67a和miR-在腹足中最高，接着是外套膜，鳃和内脏团。此外，我们发现miR-12主要在腹足中表达，然后依次是内脏团，鳃和外套膜。miR-b主要在腹足和内脏团中表达而在鳃和外套膜中表达稀少。而且，miR-和miR-10表达水平在鳃，腹足和外套膜中几乎一样，在内脏团中明显低。而在新miRNAs中，Novel-14和Novel-18在腹足和外套膜中表达丰富，在鳃和内脏团表达量低。Novel-31在腹足中表达量最高，接着是外套膜和鳃，而在内脏团中非常低。Novel-2在鳃中很少表达，但在腹足外套膜和内脏团中表达高。图2-38个保守和4个新miRNAs在河蚬4个组织中（鳃，腹足，内脏团，外套膜）的表达水平2.3.5河蚬miRNAs目的基因的预测为了了解河蚬保守和新miRNAs的生物学功能，我们使用miRanda和RNAhybrid工具分析miRNAs和环境污染相关mRNA的关系。miRanda是一个基于核苷酸互补配对的miRNA目标基因预测软件，这款软件允许G=U假阳性，这在预测RNA:RNA复合体很关键[]。可以用于人，老鼠，苍蝇和蠕虫的序列预测[]。相比较而言，RNAhybrid是一款简单，快速并且灵活的任何物种miRNAs目的基因预测的软件[]。这个工具能预测miRNA和mRNA的最佳结合位点，能计算杂交结构自由能。结果显示所以的环境相关基因都有相应的miRNA作用（表2-3），metallothionein基因是miR-7的目标。miR-，miR-2b和Novel-40可能与调控河蚬hsp70有关。我们的结果还显示miR-10和miR-可以作用于cyp4的3’非翻译区。然而我们没有发现两个软件对gst-pi基因预测的交集。图4-4显示了使用miRanda和RNAhybrid预测miRNAs和它们的目的基因潜在的交联关系。图2-4miRanda和RNAhybrid预测miRNAs和它们的目的基因潜在的关系表2-3miRanda和RNAhybrid预测的河蚬miRNAs与gst-pi,hsp70,cyp4和metallothionein的关系Genes(geneID)miRandaRNAhybridConserved　　Novel　　ConservedNovelgst-pi(AY.1)　　miR-,miR-8a,miR-8bNovel-30,Novel-38miR-　　Novel-1*,Novel-4hsp70(KJ.1)miR-,miR-2a,miR-2b,miR-2c　　Novel-40　　miR-,miR-2b,miR-34,　　Novel-29,Novel-40cyp4(JQ.2)miR-10,miR-,miR-　　Novel-30,Novel-15,Novel-23,Novel-36　　miR-10,miR-,miR-,miR-,miR-a,miR-b,miR-34,miR-7　　Novel-1*,Novel-14,Novel-17,Novel-29,Novel-3,Novel-4metallothionein(EF.1)　　miR-,miR-,miR-7,　　miR-7,miR-Novel-20,Novel-29,Novel-31,Novel-6a,Novel-6b,Novel-82.4讨论我们使用Solex测序技术获取了河蚬miRNAs数据，并进行了分析。发现保守的miRNAs表达比较高。之前的研究表明绝大多数确定的miRNAs的序列和功能在不同物种间是保守的[]。miR-10在河蚬中是表达量最高达，文献报道它能抑制斑马鱼HoxB1aandHoxB3a基因[]，DavidHassel等报道了它还可以通过促进血管内皮生长因子信号转导来调控斑马鱼和人血管内皮细胞的血管原行为[]。而且在其他几个物种中发现miR-10能与一系列Hox基因共表达，能调控Hox转录本的翻译[]。这些都将为以后研究河蚬miR-10的功能提供基础。Xu等[]报道了牡蛎中miR-b主要在消化腺中表达，接下来是鳃和外套膜。Wong等[]研究发现miR-的过量表达可能在细胞分化过程中引起舌鳞状细胞癌[]。组织分布结果表明绝大多数河蚬miRNAs主要在2或3个组织中表达，仅有少数miRNAs在多组织中高度表达。河蚬新miRNAs的表达量低，在珍珠贝中53个新miRNAs中只有3个测序数大于次[29]，此外，25个花生新miRNAs中只有5个检测频率大于0，绝大多数测序数小于[]。我们的结果与之前的研究是一致的[,]。新miRNAs的低丰度表达表明了它们在某些组织中或特定发育阶段中发挥作用。2.5本章小结在本研究中，我们使用Solex深度测序总共从河蚬小RNA库获得28条高质量序列。鉴定了45条保守的和39条新的河蚬。使用荧光定量PCR验证了8个保守的和4个新的miRNAs，发现它们在4个组织中表达各有差异。此外我们还是用了2种软件预测了miRNAs和4个环境污染相关基因的关系。本研究的结果为深入了解河蚬和其他双壳贝类的miRNA提供了基础。第三章河蚬CCK,Conopressin和FFamide神经肽基因cDNA全长克隆3.1引言目前，人，老鼠等脊椎动物的神经肽研究的比较成熟，无脊椎动物神经肽研究主要集中在海蜗牛，牡蛎，章鱼等海洋软体动物，没有淡水双壳类动物的文献报道，神经肽的毒理学研究也很少，开发河蚬典型神经肽标志物，并应用于毒理学研究十分必要。本研究选取了CCK,Conopressin和FFamide神经肽作为研究基因。本章以转录组测序获取的神经肽片段为参考，运用RACE技术，成功克隆了CCK,Conopressin和FFamide神经肽基因的全长，对全长序列进行了生物信息学分析，使用荧光定量PCR测量了神经肽在河蚬不同组织中的表达分布，并评估了有机磷酸酯对神经肽的影响，筛查了神经肽标志物。3.2材料与方法3.2.1实验材料3.2.1.1试剂TRIzol购自Invitrogen(USA）公司；荧光定量PCR试剂盒、琼脂糖、M-MLV试剂盒、Oligo-(dT）18、DNaseI和dNTP购自Promega（USA）公司；bp和bpladder购自天根生物（北京，中国）公司；SMARTRACEcDNAamplificationkit购自Clontech(USA）公司；TaKaRaMiniBESTAgaroseGelDNAExtractionKit,pMD20-Tvector和E.coliJM感受态细胞购自TaKaRa(Dalian,China）公司；三氯甲烷，异丙醇和无水乙醇都是国产分析纯。3.2.1.2实验仪器CentrifugeR离心机(eppendorf,USA）PowePacBasic电泳仪(BIO-RAD,USA）GelDocXR+凝胶成像仪(BIO-RAD,USA）梯度热循环仪（Veritithermalcyclesystem）（LifeTechnologies，USA）MultiskanGO酶标仪（ThermoScientific，USA）荧光定量PCR仪Real-TimePCRsystem（LifeTechnologies，USA）3.2.1.3统计分析与绘图软件SPSS16.0软件，Origin8.0软件3.2.2河蚬的实验室养殖河蚬购自洪泽湖，在盱眙县老子山镇洪泽湖码头采集，壳长在1-3cm左右，年龄在1-2龄左右。带回实验室用恒温养殖系统进行驯养。采用流水养殖，建立一套恒温的流水系统进行养殖，选用水泥池流水循环系统养殖河蚬，以水泵提供流水动力，建有过滤池和养殖池，水经过水泵从过滤池传送到养殖池，再流回过滤池进行过滤。池底铺粒径为0.5mm左右的细沙，所用水为目纱绢过滤并充分曝气的自来水，室内温度使用空调控制，水温保持在20±1oC，水质硬度在mg/L以下,光照周期为12h：12h，饵料采用实验室纯培养的斜生栅藻和小球藻，或者以高级螺旋藻藻粉作为饵料。河蚬实验室养殖规范见附录1。3.2.3RNA提取和cDNA合成3.2.3.1.RNA提取操作步骤：河蚬组织总RNA的提取采用Trizol试剂法，在无菌和无RNA酶的超净工作台进行，具体操作步骤如下：(1)取50-mg河蚬组织迅速放入预冷的1.5mlEP管，迅速加入-μL冰预冷的Trizol液，然后用电动棒碾磨均匀，接着加入冰预冷的μLTrizol液，注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%，室温放置5min，使其充分裂解。(2)以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入冰预冷的氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒，室温放置3min，然后放入离心机，4℃，1转，离心15min，吸取上层水相，尽量不要将沉淀吸入，移至另一1.5mLEP管中。(3)每管加入uL冰预冷的异丙醇混匀，室温放置10min。(4)1g，4°C，离心10min，弃上清，此时RNA沉于管底。(5)用DEPC处理过的水和无水乙醇配制成75%乙醇，按每mlTrizol液加入至少1ml的比例加入75%冰预冷的乙醇，用手轻轻上下翻转约50次，用移液器反复吸吹悬浮的沉淀。(6)0g，4°C下离心5min，尽量弃上清。(7)室温瞭干，注意不要干燥过分，然后将RNA溶于无核酸水中。利用DNA的紫外分光光度计检测提取的RNA样品纯度和浓度。一般OD/OD.8时，样品纯度符合要求，其余的RNA于-80℃冻存，进行反转录合成。3.2.3.2.去除RNA中的DNA（1）用RNase-freeDNase去除样品中DNA污染。DNaseⅠ消化处理反应体系(20μL）RNA　　16μLDNaseⅠ　　2μL10×DNaseⅠBuffer　　2μLTotalvolume20μL（2涡旋混匀后，37°C水浴30min。（3）加入RQ1DNaseStopSolution1μL，混匀，瞬时离心，65°C反应10min。（4）RNA浓度采用紫外分光光度计测定A/A大于1.8，其余的RNA于-80℃冻存，进行反转录合成。3.2.3.3.cDNA第一链的合成首先使用MultiskanGO酶标仪对提取并去除DNA污染的总RNA进行定量，使用Promega

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