mRNA引物设计和验证细节问题

mRNA引物设计，冠泰生物已经讲过很多很多次了；

细节包括：

1.基因的序列如何查找，有相应的专题；

2.同一个基因，存在多个转录本时，应该如何设计？

3.跨外显子设计引物是必须的么？如果不能跨外显子设计引物，那么怎么避免基因组污染带来的影响么？

4.抽提样本一定会有基因组污染么？别人做抽提，Trizol法不是也很容易的么，为什么别人没有基因组污染啊？

5.为什么同一套引物，有的样本是单峰，看着也不错，有的是双峰，乱得很？这个引物是不是不能用啊？

6.为什么文献说是mRNA表达有差异，而我的实验，差异总是做不出来？到底问题出在哪里？

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