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ACSChemBiol可进行单分
大家好,这周给大家分享一篇来自ACSChemicalbiology的文章。
核苷酸序列特异性的荧光标记是利用诸如单分子荧光共振能量转移(smFRET)进行核苷酸折叠和功能研究的前提。目前虽已经发展了几种荧光标记技术,但是都存在着随着核苷酸长度家常标记效率明显下降,或者标记基团过大影响原有核苷酸的三维结构和功能问题。作者现在设计了一个新的荧光标记技术。
主要的方法是将目标序列和设计的带有反应活性基团的核苷酸序列进行互补配对,使所带活性基团位于适合反应的位置与目标核苷酸序列中的腺嘌呤进行反应,反应后设计的小核苷酸序列脱去,再在已经进行修饰的腺嘌呤位点连接荧光基团即可完成序列特异性荧光标记。
作者将这种荧光标记方法应用于短的DNA片段和较长的DNA片段以及来源于酿酒酵母的核苷酸的RNA片段,最终发现距识别位点1-4个核苷酸的位置具有很好的标记效果。这种方法的最大好处在于不仅可以进行DNA的特异性标记,还可以对RNA进行标记,同时可以利用其他荧光标记方法实现多种荧光在不同位点的组合标记。
DOI:10./acschembio.6b