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真的错不了根源带您鉴别凝结芽孢杆菌

凝结芽孢杆菌（Bacilluscoagulans），革兰氏阳性菌，兼性厌氧，细胞呈杆状，端生芽孢，无鞭毛。能分解糖类生成L-乳酸，为同型乳酸发酵菌。最适生长温度为45-50℃，最适pH为6.6-7.0。目前学术界将其归属于芽孢杆菌目、芽孢杆菌科、芽孢杆菌属。关于凝结芽孢杆菌的最早记录见于HammerB.W.在年发表的论文，Hammer从酸败的罐头牛奶中分离出该菌，并描述为新种。20世纪30年代，奥地利著名细菌学家霍洛威茨·瓦尔沙文教授与诺沃泰罗教授等人从变酸的番茄沙司样品中分离到大量长有荚膜的芽孢状微生物，并鉴定为新的微生物，因其产生乳酸和凝结素，故将其正式命名为“凝结芽孢杆菌”（Bacilluscoagulans）。年，学术界又统一命名了凝结芽孢杆菌，其模式菌株为ATCC。年美国食品与药物管理局（FDA）和美国饲料监管协会（AAFCO）公布的可安全用于微生态制剂的微生物菌种有43种，其中就包括凝结芽孢杆菌。我国农业部公告等号文件《饲料添加剂品种目录（）》将凝结芽孢杆菌加入。

凝结芽孢杆菌既可以产酸也可形成芽孢，兼具乳酸菌和芽孢菌的共同优点，此外该菌还具有耐热、耐酸、耐胆盐等其他优良特性，但是该菌的生产工艺确不太容易控制，想要得到高菌量、稳定性好的凝结芽孢杆菌产品并不是那么容易。目前国内市场有约十几家大小企业宣传有凝结芽孢杆菌产品（单菌或复合菌），但实际情况并不理想，以有一定产酸能力的枯草、地衣、蜡样等芽孢菌或者粪肠球菌来冒充凝结芽孢杆菌的不在少数，那么真正的凝结芽孢杆菌长什么样？用何种方式可以鉴别出来呢？接下来，小编就带您认识认识，教您鉴别鉴别。

1.菌落形态鉴别

（图1凝结芽孢杆菌在MRS和YPD培养基上）

凝结芽孢杆菌不同于普通芽孢菌，在普通营养琼脂培养基（NA）上生长不良，而在含糖的培养基MRS和YPD上生长良好。用含CaCO3的MRS培养基倾注，37℃培养48h，可看到该菌产生了很多酸出现了溶钙圈（图1上左）。用YPD培养基平板涂布的方法也可培养到生长良好的凝结芽孢杆菌，37℃培养48h后即可看到表面生长良好的菌落。YPD培养基和MRS培养基的菌落基本一致，均为白色、边缘接近规则的圆形，表面凸起且平滑，闪烁着油光，菌落不透明也不产生色素。

2.菌落镜检鉴别

（图2凝结芽孢杆菌染色后镜检图）

凝结芽孢杆菌，产孢前经结晶紫染色后，用倍油镜镜检，可见长杆状（图2左）。当生长到一定时期后，杆变短开始产孢（图2右）。其营养体在扫描电镜下观察，一般为0.6-4μm两端钝圆的长杆状，多单独存在，不具鞭毛和纤毛（见图3）。

（图3凝结芽孢杆菌扫描电镜图（SEM））

3菌落16SrRNA鉴定鉴别

通过菌落形态观察和菌落镜检后，如果想进一步确认是否为凝结芽孢杆菌，可挑取平板上的菌落纯化后，接种到MRS液体培养基中培养至浑浊，提取该菌株基因组DNA，然后通过引物做PCR扩出16SrRNA基因全长，让测序公司帮忙测序。测序结果通过BLAST比较，可知是否为凝结芽孢杆菌。

4小结

综上所述，凝结芽孢杆菌的鉴别分三步：

（1）菌落形态观察。凝结芽孢杆菌在MRS（含CaCO3）培养基上可以产生酸透明圈，在MRS和YPD培养基上菌落形态均为白色、边缘接近规则的圆形，表面凸起且平滑，闪烁着油光，菌落不透明也不产生色素。

（2）菌落镜检鉴别。菌落镜检为0.6-4μm两端钝圆的长杆状菌，生长后期可产孢。

（3）菌落16SrRNA鉴定鉴别。菌落经16SrRNA序列鉴定，BLAST比对可知是否为凝结芽孢杆菌。

最后小编提醒您，如果是和其他菌的复合菌产品，最好严格厌氧培养，否则可能观察不到凝结芽孢杆菌。